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《中國植物保護學會2019年學術年會論文集》2019年
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高粱轉錄因子SbGRF4基因克隆及原核表達分析

陳俊  屈志廣  陳美晴  蔣君梅  李向陽  謝鑫  
【摘要】:GRF (growth regulating factor)是一类植物特有的转录因子,其到场调节植物生长、发育以及抗逆等过程。本研究以高粱BTx623为质料,以cDNA为模板扩增全长SbGRF4基因,并对其进行生物信息学及原核表达分析。结果表明,SbGRF4全长1 221bp,编码406个氨基酸,蛋白理论分子大小约为44kDa,蛋白质等电点为7.05。进化树分析表明,SbGRF4与玉米GRF4的亲缘性较高;蛋白质序列分析表明,SbGRF4蛋白为亲水性蛋白,定位在细胞核中;二级结构预测发现其α螺旋和无规则卷曲占比最高,分别到达25.37%和64.04%。为获得SbGRF4可溶性蛋白,构建了pET-28a-SbGRF4重组质粒进行原核表达,分别对表达菌株、诱导温度以及IPTG诱导浓度进行优化。结果显示,SbGRF4最佳表达菌株为JM109 (DE3)菌株,最佳诱导温度为25℃,最佳IPTG诱导浓度为0.6mmol/L,最后用Western blot对表达的SbGRF4蛋白进行验证。本研究为进一步研究高粱SbGRF4蛋白的结构和功能奠定基础,通过对该基因的表达研究,可为后续研究高粱GRF转录因子提供一定的科学基础。

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